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一.篩選

    誘變育種包括誘變和篩選兩個(gè)過(guò)程，在誘變育種中突變是隨機(jī)的，但篩選是定向的。篩選的條件決定選育的方向，因?yàn)橥蛔凅w高產(chǎn)性能等優(yōu)良特性總是在一定的培養(yǎng)條件下才能表現(xiàn)出來(lái)。培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件是決定菌種某些特性保留或淘汰的篩子。ELISA試劑盒

1.篩選方案

    在誘變育種中，為了提高篩選效率，往往將篩選工作分為初篩和復(fù)篩兩步進(jìn)行。初篩的目的是刪去明確不符合要求的大部分菌株，把性狀類似的菌株盡量保留下來(lái)，使優(yōu)良菌種不至于漏網(wǎng)。因此，初篩工作以量為主，測(cè)定的性還在其次。初篩的手段應(yīng)盡可能快速、簡(jiǎn)單。復(fù)篩的目的是確認(rèn)符合要求的菌株，所以，復(fù)篩步驟以質(zhì)為主，應(yīng)測(cè)定每個(gè)菌株的指標(biāo)。由于誘變產(chǎn)生高產(chǎn)突變株的頻率很低，而且實(shí)驗(yàn)誤差又在所難免·因此，在篩選工作中常采用多級(jí)水平篩選，有利于獲得優(yōu)良菌株。多級(jí)水平篩選的原則是讓誘變后的微生物群體相繼通過(guò)一系列的篩選．每級(jí)只選取一定百分比的變異株，使被篩選的菌株逐步濃縮。如在工作量限度為20O只搖瓶的具體條件下，為了取得zui大的效果，有人提出以下的篩選方案。

第三輪、第四輪……(操作同上)。

    初篩和復(fù)篩工作可以連續(xù)進(jìn)行多輪，直到獲得較好的菌株為止。采用這種篩選方案，不僅能以較少的工作量獲得良好的效果，而且，還可使某些眼前產(chǎn)量雖不很高，但有發(fā)展前途的優(yōu)良菌株不至于落選。

    通過(guò)以上篩選方案將挑選的菌落移種斜面培養(yǎng)后直接接入搖瓶培養(yǎng)，發(fā)酵產(chǎn)物采用常規(guī)法進(jìn)行測(cè)定．這種篩選方法稱為常規(guī)篩選法。

    為了進(jìn)一步提高篩選效率，可以在常規(guī)篩選法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)：一方面分離到平皿上的菌落采用瓊脂塊法進(jìn)行預(yù)篩選；另一方面，初篩搖瓶發(fā)酵液中產(chǎn)物分析，采用簡(jiǎn)便、快速的瓊脂平板測(cè)定法或其他簡(jiǎn)便方法。ELISA試劑盒

2.篩選方法

    篩選方法可以分為隨機(jī)篩選和平板菌落預(yù)篩選。隨機(jī)篩選是指隨機(jī)挑選平板菌落進(jìn)行搖瓶篩選。平板菌落預(yù)篩選是根據(jù)特定代謝產(chǎn)物的特異性，在瓊脂平板上設(shè)計(jì)一些巧妙的篩選方法和活性粗測(cè)方法用于誘變后從試樣中檢出突變株的一種瓊脂平板篩選法。平板菌落預(yù)篩選主要采用以下幾種方法。

(1)根據(jù)形態(tài)變異進(jìn)行預(yù)篩選研究不同菌落形態(tài)與能力之間的關(guān)系，在進(jìn)行搖瓶篩選前，先根據(jù)菌落形態(tài)進(jìn)行一次預(yù)篩選，即淘汰低產(chǎn)菌落形態(tài)的菌落，挑取高產(chǎn)菌落形態(tài)的菌落接種斜面，進(jìn)行搖瓶篩選。在根據(jù)菌落形態(tài)進(jìn)行預(yù)篩選時(shí)要注意，往往一些不為人注意的微小變化卻是高產(chǎn)的源頭。

(2)根據(jù)平板菌落生化反應(yīng)直接挑取突變株

①平板菌落直接選育法單孢子懸浮液經(jīng)誘變后的存活孢子，經(jīng)適當(dāng)稀釋后涂布于平板上培養(yǎng)，待平板菌落長(zhǎng)好后噴射檢定菌，再繼續(xù)培養(yǎng)18h，以抑菌圈直徑與菌落直徑之比為指標(biāo)進(jìn)行篩選。

②采用指示劑篩選高產(chǎn)菌株 如產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法，常在培養(yǎng)基中加入溴百里酚藍(lán)指示劑，培養(yǎng)后在藍(lán)色平板菌落周圍出現(xiàn)黃色，測(cè)定其直徑大小，初步選出優(yōu)良的突變株。

③采用冷敏感菌株篩選抗生素突變株 以冷敏感菌為檢驗(yàn)菌，它在20℃下不生長(zhǎng)，而放線菌能生長(zhǎng)。因此，可將單孢子懸浮液經(jīng)誘變后的存活孢子和冷敏感檢驗(yàn)菌一起涂布于平板上，在20℃下培養(yǎng)，待菌落培養(yǎng)成熟后．再在37℃下培養(yǎng)18h左右，以抑菌圈直徑與菌落直徑之比為指標(biāo)進(jìn)行篩選。

④用于酶類產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法用于產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法：以淀粉為底物制成平板，誘變后的菌體涂布平板，菌落形成后，用碘液浸涂，根據(jù)菌落周圍形成的無(wú)變色區(qū)大小決定取舍。

    蛋白酶產(chǎn)生菌的平板預(yù)篩法：以酪素為底物制成平板，誘變后的菌體涂布平板，根據(jù)菌落周圍形成的透明圈大小決定取舍。

(3)濃度梯度法抗生素產(chǎn)生菌合成抗生素的能力與其對(duì)自身抗生素的抗性有關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，抗生素產(chǎn)生菌對(duì)自身抗生素的抗性越高，其能力也越高。篩選抗生素抗性突變株可用濃度梯度法，即在含抗生素的濃度梯度平板上篩選抗生素抗性菌株。濃度梯度平板的制備及平板上菌落生長(zhǎng)情況。

(4)瓊脂塊法春雷霉素瓊脂塊預(yù)篩選法。選擇一種既有利于菌體生長(zhǎng)．又能滿足產(chǎn)物形成的培養(yǎng)基制成平板，當(dāng)菌落剛長(zhǎng)出時(shí)，即用打孔器將菌落取出，轉(zhuǎn)移到空白的無(wú)菌平板培養(yǎng)，培養(yǎng)成熟后再轉(zhuǎn)移到檢定平板(含敏感菌或底物)上，培養(yǎng)一定時(shí)間后，測(cè)量瓊脂塊周圍形成的抑菌圈或水解圈大小。

    瓊脂塊法比一般直接分離在平皿上判斷活性的反應(yīng)圈要準(zhǔn)確。所有菌落都在同一面積的瓊脂塊上，避免相互間的干擾。每個(gè)菌落的產(chǎn)物都在同一體積的瓊脂塊中，避免由于擴(kuò)散不同而造成的誤差。瓊脂塊法的zui大優(yōu)點(diǎn)是可以大幅度增加篩選量。其不足之處是培養(yǎng)條件與發(fā)酵有很大差別，易造成漏選。ELISA試劑盒

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