水溶液中的氨基酸為兼性離子,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物,使N+H3上的H+游離出來,這樣就可以用堿滴定N+H3放出H +,測出氨基氮,從而計算氨基酸的含量。ELISA試劑盒
若樣品中只含有單一的已知氨基酸,則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸(如蛋白質(zhì)水解液),測不能由此法算出氨基酸的含量。
與甲醛作用后,生成的化合物不穩(wěn)定,導(dǎo)致滴定后結(jié)果偏低;含酚基結(jié)構(gòu),導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。
測定氨基酸含量的材料、試劑與器具
(一)試劑
1、0.5%酒精溶液
稱0.5g溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴藍溶液
取0.05溴麝行草酚藍溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%溶液
取1g溶于100ml蒸餾水。 ELISA試劑盒
4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液
5、中性甲本醛溶液
取50ml,加0.5%指示劑約3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉紅色,臨用前中和。
(二)實驗器具
1、錐形瓶 2、堿式滴定管
3、 移液管洗耳球 4、天平
5、容量瓶 6、試劑瓶
7、量筒 8、玻棒與燒杯
注意事項 :利用甲醛滴淀法可以用來測定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加,滴定值也增加,當?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后,滴定值不再增加。ELISA試劑盒
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