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胎盤泌乳素Elisa試劑盒的操作步驟
點擊次數(shù)：820 更新時間：2016-07-25
胎盤泌乳素Elisa試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。樣品和標記抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。
2．將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3．酶標板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4．反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5．將準備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6．0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7．將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8．0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）。
10．用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11．根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。 上一篇 紫外線消毒器優(yōu)勢和原理 下一篇 如何選擇合適的定量PCR儀
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。
2．將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3．酶標板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4．反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5．將準備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6．0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7．將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8．0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）。
10．用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11．根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。 上一篇 紫外線消毒器優(yōu)勢和原理 下一篇 如何選擇合適的定量PCR儀