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植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒現(xiàn)貨供應
點擊次數(shù):843 更新時間:2017-03-22

VE Elisa Kit試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被乙酰羧化酶合成酶(ACC)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰羧化酶合成酶(ACC)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2.  標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行。
3.  植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
4.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒操作注意事項
  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,zui終結果乘以5才是樣本實際濃度。
  嚴格按照VE Elisa Kit說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、1、2、4、8、16 U/L
試劑的準備
 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
植物乙酰羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒試劑盒性能
1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 U/L。
3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.  重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.  VE Elisa Kit有效期:6個月

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