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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

肺巨噬細胞由單核細胞分化而來，廣泛分布在肺間質(zhì)內(nèi)，在細支氣管以下的管道周圍和肺泡隔內(nèi)較多。肺巨噬細胞的吞噬、和分泌作用都十分活躍，有重要防御功能。吸入空氣中的塵粒、等異物進入肺泡和肺間質(zhì)，多被巨噬細胞吞噬，故細胞胞質(zhì)內(nèi)常見塵粒、等物進入肺泡和肺間質(zhì)，多被巨噬細胞吞噬，故細胞胞質(zhì)內(nèi)常見塵粒、次級溶酶體及吞噬體等。

肺巨噬細胞還可吞噬衰老的紅細胞，在心力衰竭患者出現(xiàn)肺瘀血時，大量紅細胞從溢出，被巨噬細胞吞噬。吞噬異物的巨噬細胞，有的從肺泡腔經(jīng)呼吸道粘液流動和纖毛運動而被咳出，有的進入肺管隨進入肺結(jié)內(nèi)。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常肺組織。

2)細胞鑒定：CD68或MAC387熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：圓形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 巨噬 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA 試劑盒

Rat anaphylatoxin / compleme fragme 4a (C4a) ELISA Kit 大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)檢測試劑盒

HumanactivatedproteinC,APCELISAKit 人活化蛋白C(APC)檢測試劑盒 進口分裝

Chickenniicoxide,NO檢測試劑盒雞(NO)檢測試劑盒

載玻片細胞P35蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseFollistatin,FSELISAKit小鼠卵泡抑素(FS)檢測試劑盒

ACVR1重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白  Protein

Nrf2 peptide 核因子2相關(guān)因子2抗原 0.5mgNrf2 peptide 核因子2相關(guān)因子2抗原

CD40LG重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (His 標簽) Protein

ALB Protein Human 重組 Human Serum Albumin / HSA / ALB 蛋白

COLEC10 Protein Mouse 重組小鼠 COLEC10 蛋白

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ACVR1重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白  Protein

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CD40LG重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (His 標簽) Protein

豬白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA 試劑盒

Human ai BP180 aibody (BP180-Ab) ELISA Kit 人抗BP180抗體(BP180-Ab)檢測試劑盒

PorcineIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALD(Humanaldosterone)ELISAKit人固同

血液鎂離子(Mg)濃度酶反應(yīng)光譜法定量檢測試劑盒20次

MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)檢測試劑盒

兔肺巨噬細胞中文名稱   方法   規(guī)格

人組織蛋白酶K(cath-K)ELISAKit   ELISA. 

人骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA. 

人醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。