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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

癌組織由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細(xì)胞構(gòu)成癌實(shí)質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來(lái)源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營(yíng)養(yǎng)癌實(shí)質(zhì)的作用，不具有特異性。

當(dāng)實(shí)體瘤超過(guò) 1-2mm時(shí)，需要通過(guò)新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞來(lái)獲取癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞可通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子來(lái)發(fā)揮促進(jìn)癌血管生成的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中也能觀察到相似的EMT過(guò)程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直接決定腫瘤的發(fā)展。

多種因素可影響該界面，其中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞是數(shù)量豐富的基質(zhì)細(xì)胞，在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞 EMT過(guò)程中發(fā)揮重要作用。它通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞間相互接觸及分泌各種細(xì)胞因子、蛋白酶類(lèi)等，促進(jìn)上皮細(xì)胞及其細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，并對(duì)界面各組分產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于人手術(shù)胰腺癌組織。

2）細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽(yáng)性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豚鼠白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒

Rat angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 大鼠血管緊張素原(aGT)檢測(cè)試劑盒

HumanAi-proteinase3aibodyIgG,PR3Ab-IgGELISAKit 人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3Ab-IgG)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumancyclophilinA,CyPA檢測(cè)試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)檢測(cè)試劑盒

組織GSK3激酶總活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)檢測(cè)試劑盒

DCN重組人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白  Protein

趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 14 (CCL14)

CD1D & B2M重組人 CD1D & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

AIMP1 Protein Human 重組人 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H4N4 重組甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 14 (CCL14)

AIMP1 Protein Human 重組人 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DCN重組人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白  Protein

HA Protein H4N4 重組甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD1D & B2M重組人 CD1D & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

豬白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒

Human ai SS-A/Ro aibody ELISA Kit 人抗SS-A/Ro抗體檢測(cè)試劑盒

PorcineIerleukin1β,IL-1βELISAKit 豬白介素1β(IL-1β)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAIFELISAKit大鼠凋亡誘導(dǎo)因子

血液牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit小鼠特異生長(zhǎng)因子/相關(guān)因子(TGSF)檢測(cè)試劑盒

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞中文名稱(chēng)   方法   規(guī)格

大鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISAKit   ELISA. 

大鼠激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISAKit   ELISA. 

大鼠乙酰受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.