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細(xì)胞簡介：

臍帶血是胎兒出生時臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。臍帶血中含有多種成分。目前，臍帶血已經(jīng)成為的造血干細(xì)胞的重要來源之一。此外，臍帶血中還含有豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞。

臍帶血中的干細(xì)胞含量豐富，明顯超過外周血含量，相當(dāng)或超過骨髓中的含量，其間充質(zhì)干細(xì)胞因其可以在體外誘導(dǎo)分化為多種組織細(xì)胞，以再生和修復(fù)病變或損傷的組織細(xì)胞，因此目前的應(yīng)用比較廣泛。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于臍血。

2)細(xì)胞鑒定：CD44熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

山羊白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒

Rat apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)檢測試劑盒

HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 人過氧化酶(GSH-Px)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanheatshockprotein27,HSP-27檢測試劑盒人熱休克蛋白27(HSP-27)檢測試劑盒

組織Q含量比色法定量檢測試劑盒20次

Humanmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)檢測試劑盒

CD59重組大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白  Protein

FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 1mgFRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白

EPOR & CD131重組人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

ADIPOQ Protein Human 重組人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白

JAM2 Protein Mouse 重組小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白

FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 1mgFRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白

ADIPOQ Protein Human 重組人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白

CD59重組大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白  Protein

JAM2 Protein Mouse 重組小鼠 JAM-2 / JAM-B 蛋白

EPOR & CD131重組人 EPOR & CD131 Homodimer 蛋白 Protein

植物血凝素/凝集素(PHA)檢測試劑盒

Human ai calpastatin aibody (ACAST-D IV) ELISA Kit 人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)檢測試劑盒

PorcineImmunoglobulinM,IgMELISAKit 豬免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFP-L3(Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3)ELISAKit人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3

血液A高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

MouseThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit小鼠促甲狀腺素(TSH)檢測試劑盒

人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞植物類黃測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

植物總酚測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

植物原測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

尿酸含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣