產(chǎn)品名稱：重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）
產(chǎn)品特點：重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）的相關產(chǎn)品：Estradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgEstradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白GDNF Protein Human 重組人 GDNF 蛋白KDR重組大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (Fc 標簽) Protein
產(chǎn)品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：88
重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）的詳細資料：
產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：Human CNTF protein
產(chǎn)品中文名稱：重組人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）
規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg
貨號：EY-01X8635
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
標簽:無標簽
表達宿主:大腸桿菌
種屬:人
序列:氨基酸序列來源于：人源 CNTF(P26441)(Ala2-Met200) 表達的蛋白片段。
蛋白長度：重組人CNTF由199個氨基酸組成，預測分子量為22 KD。
純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測
采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 0.1。
產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 PBS，pH 7.5。
基因ID:1270
使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用該產(chǎn)品配套的Reconstit動?動
背景
睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（Ciliary neurotrophic factor, CNTF）作為細胞因子家族成員之一，是一種多功能細胞因子，其對神經(jīng)細胞的生長、分化具有明顯的營養(yǎng)作用。CNTF廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)，具有廣譜營養(yǎng)作用，如：運動神經(jīng)元、感覺神經(jīng)元、交感神經(jīng)元、副交感神經(jīng)元、海馬神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細胞，可以提高體內(nèi)外各種類型外周神經(jīng)元的存活。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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GAD1 Protein Human 重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 (His 標簽)
ACVR1 Protein Rat 重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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