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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類(lèi)或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Human BMP-4 Protein

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白 4（BMP-4）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8712
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無(wú)標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來(lái)源于：人源 BMP-4 (NC_000014.9) (Lys303-Arg408)表達(dá)的蛋白片段。

蛋白長(zhǎng)度：重組人 BMP-4 由 106 個(gè)氨基酸組成，預(yù)計(jì)分子量為 11.9 kDa。

純度:> 95 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 0.1。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無(wú)菌的 500mM NaCl 20mM Tris , pH 8.0溶液。

基因ID:652

使用中注意事項(xiàng)動(dòng)?動(dòng)

背景

骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（BMP-4）是九種結(jié)構(gòu)相關(guān)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白之一，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）超家族的分泌蛋白。成熟的 BMP-4 是一種二聚體，能與具有絲/蘇激酶活性:的多聚跨膜受體結(jié)合。BMP-4 可促進(jìn) HCC 細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)自噬。機(jī)制研究表明，BMP-4誘導(dǎo)的自噬是通過(guò)激活JNK1/Bcl2通路介導(dǎo)的。JNK1抑制劑和JNK1基因敲除可削弱BMP-4誘導(dǎo)的自噬，消除BMP-4促進(jìn)的HCC細(xì)胞生長(zhǎng)。BMP-4通過(guò)自噬激活JNK1/Bcl-2信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)HCC增殖。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性?xún)?nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

小鼠NOD樣受體-2(NOD-2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat hyaluronic acid (HA) ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)酸(HA)檢測(cè)試劑盒

HumanCoisolELISAKit 人(Coisol)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCollagenaoaibody,CLA檢測(cè)試劑盒人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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Humaecombinationactivatinggene2,RAG-2ELISAKit人重組激活基因2(RAG-2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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兔降解產(chǎn)物(rabbit FDP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

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兔堿性成纖維生長(zhǎng)因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

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CLIAKitforGzms-B(HumangranzymesB)ELISAKit人顆粒酶B

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RatUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit大鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白 4（BMP-4）DLL4重組小鼠 DLL4 / Delta4 蛋白 Protein

CC16(Clara cell protein 16 0.5mgCC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細(xì)胞蛋白(Clara細(xì)胞分泌蛋白)抗原

NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

HK3 Protein Human 重組人 Hexokinase-3 / HK3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

IL17RA Protein Rat 重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)