產(chǎn)品名稱：重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）
產(chǎn)品特點：重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）的相關(guān)產(chǎn)品：GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原CXCL10 Protein Human 重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白COLEC12重組大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Prote
產(chǎn)品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：84
重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）的詳細資料：
產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：Human DKK-1 Protein
產(chǎn)品中文名稱：重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）
規(guī)格：10 μg/500 μg/100 μg/1 mg
貨號：EY-01X8725
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
表達宿主:大腸桿菌
種屬:人
序列:氨基酸序列來源于： 表達人DKK-1 (Thr32-His266) (O94907)。
蛋白長度：重組人DKK-1由235個氨基酸組成，預測分子量為25.8 kDa。
純度:> 98 %，使用SDS-PAGE檢測
通過LAL法測定，每微克蛋白里內(nèi)毒素含量<1 EU。
產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的PBS.
基因ID:22943
使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用該產(chǎn)品配套的Reconstitution Buffer進行復溶，且濃度不低于1動?動
背景
Human DKK-1 (Dickkopf related protein 1) is a secreted antagonist of Wnt/beta-Catenin signaling. It interacts with LRP-6, and internalized complexes of DKK-1/LRP-6/Kremen 2 can downregulate Wnt signaling. The balance between Wnt signaling and Human DKK-1 inhibition is critical for bone formation and homeostasis. In addition, Human DKK-1 can act as either a tumor suppressor or promoter of metastasis.
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3檢測試劑盒胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞線粒體復合物III蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次
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FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein
CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白
LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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