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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人軟骨分離自軟骨組織；軟骨組織由軟骨細(xì)胞、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強(qiáng)，這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞，并形成軟骨基質(zhì)，細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細(xì)胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個分布，體積較小，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的人軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2~3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶試劑盒   小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶試劑盒、小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒   小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白試劑盒、小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)試劑盒   小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)試劑盒、小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶試劑盒   小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶試劑盒、小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠鐵調(diào)素(Hepcidin)試劑盒 96T/48T

Rat melanocyte aibody (MC Ab) ELISA Kit 大鼠黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)試劑盒

HumanglycolipidaoaibodyELISAKit 人抗糖脂抗體(glycolipid)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickeoxoplasmacirculatingaigen,TCA試劑盒雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞RHO蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MousefactorB,BFELISAKit小鼠B因子(BF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

LGMN重組小鼠 Legumain/ LGMN 蛋白 Protein

CK18(Cytokeratin 18 0.5mgCK18(Cytokeratin 18) 細(xì)胞角蛋白18(多肽)

PARP3重組人 PARP-3 / PARP3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CFL2 Protein Human 重組人 CFL2 / cofilin 2 / ADF 蛋白

VSIG4 Protein Mouse 重組小鼠 VSIG4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

CK18(Cytokeratin 18 0.5mgCK18(Cytokeratin 18) 細(xì)胞角蛋白18(多肽)

CFL2 Protein Human 重組人 CFL2 / cofilin 2 / ADF 蛋白

LGMN重組小鼠 Legumain/ LGMN 蛋白 Protein

VSIG4 Protein Mouse 重組小鼠 VSIG4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

PARP3重組人 PARP-3 / PARP3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

人軟骨細(xì)胞大鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體(GI)試劑盒 ，英文名： GI ELISA Kit

Niu Shousu (LEP) ELISA Kit 牛瘦素(LEP)試劑盒

RatDehydroepiandrosteronesulfate,DHEA-SELISAKit 大鼠脫輕表雄酮硫酸酯(DHEA-S)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHMGB-1ELISAKit大鼠高遷移率族蛋白B1

細(xì)胞PKCι激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitE-Cad大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白