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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔滋養(yǎng)層干分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤組織細(xì)胞的祖細(xì)胞，與胚胎著床和胎盤的形成密切相關(guān)。胚胎著床和胎盤形成是母體與胎兒建立聯(lián)系的關(guān)鍵時(shí)期，此時(shí)期滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖速度快，滋養(yǎng)層干細(xì)胞自我更新和分化旺盛，與多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及其增殖、功能調(diào)節(jié)的失常有密切關(guān)系。在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育過(guò)程中，胚胎細(xì)胞次分化形成內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)外胚層。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤細(xì)胞的前體細(xì)胞，在胎盤發(fā)育中有重要作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔滋養(yǎng)層干采用囊胚組織貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔滋養(yǎng)層干經(jīng)HLA-E(白細(xì)胞抗原)免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔滋養(yǎng)層干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠17羥孕酮(17-OHP)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 17-OHP ELISA Kit

Mouse thyroglobulin (TG) ELISA Kit 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)檢測(cè)試劑盒

Mouseoxytocin,OTELISAKit 小鼠催產(chǎn)素(OT)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanPolySeriumAigen,PHSAELISAKit人多聚血清蛋白

通用型豬支原體肺(Mycoplasmahyopneumoniae;MH)試劑盒20次

ELISAKitET-1大鼠內(nèi)皮素1

CCL6重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 Protein

ABCA1(ATP binding cassette transporter A1 0.5mgABCA1(ATP binding cassette transporter A1) 腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗原

PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

COQ7 Protein Human 重組人 COQ7 蛋白

GDNF Protein Rat 重組大鼠 GDNF 蛋白

蛋白Z(PROZ)重組蛋白 Recombinant Protein Z (PROZ)

COQ7 Protein Human 重組人 COQ7 蛋白

PLAT重組小鼠 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL6 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL6 / Interleukin-6 蛋白

EPDR1重組人 EPDR1 蛋白 Protein

小鼠狀腺原酸(T3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 人內(nèi)皮素1(ET-1)檢測(cè)試劑盒

Humanβcatenin,β-CatELISAKit 人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineaPigcalcitoningenerelatedpeptide,CGRP檢測(cè)試劑盒豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母0脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseChorionicGonadoophin,CGELISAKit小鼠絨毛膜(CG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔滋養(yǎng)層干細(xì)胞小鼠受體檢測(cè)試劑盒   小鼠受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠受體試劑盒、小鼠受體檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抗復(fù)合物檢測(cè)試劑盒   小鼠抗復(fù)合物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗復(fù)合物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗復(fù)合物試劑盒、小鼠抗復(fù)合物檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠尿微量蛋白檢測(cè)試劑盒   小鼠尿微量蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠尿微量蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠尿微量蛋白試劑盒、小鼠尿微量蛋白檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠內(nèi)皮脂肪酶檢測(cè)試劑盒   小鼠內(nèi)皮脂肪酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠內(nèi)皮脂肪酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠內(nèi)皮脂肪酶試劑盒、小鼠內(nèi)皮脂肪酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。