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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞

英文名稱：Mouse Nasal Mucosal Epithelial Cells

組織來源：鼻黏膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠鼻黏膜上皮分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在機(jī)體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同，鼻黏膜又分為前庭部、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是鄰近外鼻孔的部分，有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部，有發(fā)達(dá)的上皮纖毛，它們可向咽部擺動(dòng)，黏著有塵粒、細(xì)菌的黏液排向咽部，終將它們排出體外。此外，此部分有豐富的血管與腺體，對吸入的空氣有加溫和濕潤作用。嗅部黏膜范圍較小，主要位于鼻腔頂部。它含有一種專司嗅覺的嗅細(xì)胞及嗅腺，它們分泌能溶解到達(dá)嗅區(qū)的含氣味的微粒，刺激嗅細(xì)胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺，而且還由于嗅細(xì)胞具有不同的受體，可分別接受不同化學(xué)分子的刺激，因此可產(chǎn)生不同的嗅覺。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠鼻黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡便、快速,但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

大鼠載脂蛋白A1(APOA1)檢測試劑盒 ，英文名： APOA1 ELISA Kit

Mouse thioredoxin reductase (xR) ELISA Kit 小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)檢測試劑盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1β,MIP-1βELISAkit 小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanexcisioepaircross-complemeationgroup1,ERCC1ELISAkit人切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1

細(xì)胞/組織明膠載玻片制備試劑盒20次

ELISAKitMMP-1大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1

PPIL2重組人 PPIL2 蛋白 (aa 280-457, His 標(biāo)簽) Protein

Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3 0.5mgSocs 3 (suppressor of cytokine signaling 3) 細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原

B4GALT1重組人 B4GALT1 / GGTB2 蛋白 Protein

CPVL Protein Human 重組人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白

PDGFC Protein Human 重組人 PDGF-C 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Socs 3 (suppressor of cytokine signaling 3 0.5mgSocs 3 (suppressor of cytokine signaling 3) 細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原

CPVL Protein Human 重組人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白

PPIL2重組人 PPIL2 蛋白 (aa 280-457, His 標(biāo)簽) Protein

PDGFC Protein Human 重組人 PDGF-C 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

B4GALT1重組人 B4GALT1 / GGTB2 蛋白 Protein

小鼠熱休克蛋白47(HSP47)檢測試劑盒 96T/48T

Human ornithine decarboxylase (ODC) ELISA Kit 人鳥脫羧酶(ODC)檢測試劑盒

HumanLungresistance-relatedprotein,LRPELISAKit 人肺耐藥蛋白(LRP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigiestinalfattyacidbindingprotein,iFABP檢測試劑盒豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒20次

Mousecalciumchannelblockers,CCBELISAKit小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子檢測試劑盒   小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子試劑盒、小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠腦紅蛋白檢測試劑盒   小鼠腦紅蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠腦紅蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠腦紅蛋白試劑盒、小鼠腦紅蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠腦腸肽檢測試劑盒   小鼠腦腸肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠腦腸肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠腦腸肽試劑盒、小鼠腦腸肽檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠免疫球蛋白檢測試劑盒   小鼠免疫球蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠免疫球蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠免疫球蛋白試劑盒、小鼠免疫球蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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