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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠心臟干細(xì)胞

英文名稱：Mouse Cardiac Stem Cells

組織來(lái)源：心臟組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠心臟干分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi)，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。研究發(fā)現(xiàn)，心臟干細(xì)胞是一種多潛能細(xì)胞，具有再生和克隆能力，并可分化為心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。體內(nèi)研究顯示，從心臟中分離出的心臟干細(xì)胞，經(jīng)體外簡(jiǎn)單培養(yǎng)、增殖和標(biāo)記后，移植到心肌梗死邊緣區(qū)域，心梗血流動(dòng)力學(xué)和心室壁厚度較對(duì)照組明顯改善，心肌梗死邊緣區(qū)域發(fā)現(xiàn)有標(biāo)記的心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。盡管其新生心肌細(xì)胞較小，但表達(dá)一些特殊肌蛋白如心臟肌球蛋白重鏈、α-肌動(dòng)蛋白、α-輔肌動(dòng)蛋白、連接蛋白等，證實(shí)了心臟干細(xì)胞對(duì)心肌梗死的修復(fù)作用。干細(xì)胞移植治療是目前心肌梗死和缺血性心臟病細(xì)胞重建的主要方法，成體干細(xì)胞中的c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞因其來(lái)源于心臟，有定向心臟細(xì)胞系分化的趨勢(shì)，體內(nèi)外可以分化成心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，同時(shí)自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)及倫理問(wèn)題已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。短期內(nèi)獲得治療量的自體心臟干細(xì)胞是這一治療應(yīng)用于臨床的關(guān)鍵所在。因此，研究一種新的分離培養(yǎng)方法可在短時(shí)期內(nèi)獲得大量純度較高的自體c-kit陽(yáng)性心臟干細(xì)胞成為目前干細(xì)胞領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干采用機(jī)械剪碎組織、膠原酶分次消化法結(jié)合差速貼壁、心臟干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 長(zhǎng)梭形

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠角蛋白18(K18)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： K18 ELISA Kit

Mouse neuophil chemoatacta protein 2 (NAP-2/CXCL7) ELISA Kit 小鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)檢測(cè)試劑盒

RatAi-SmoothMuscleAibody,ASMAELISAKit 大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFishCoisolELISAKit魚(yú)類

細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-10)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

RatOsteopoin,OPNELISAKit大鼠骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ANGPT2重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 Protein

堿性鞘0脂0酸二酯酶(Alk-Smase)重組蛋白 Recombinant Alkaline Sphingomyelinase (Alk-Smase)

PLS3重組人 PLS3 / Plastin 3 蛋白 Protein

DOT1L Protein Human 重組人 DOT1L / KMT4 蛋白

CD8A Protein Ferret 重組雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白

堿性鞘0脂0酸二酯酶(Alk-Smase)重組蛋白 Recombinant Alkaline Sphingomyelinase (Alk-Smase)

DOT1L Protein Human 重組人 DOT1L / KMT4 蛋白

ANGPT2重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 Protein

CD8A Protein Ferret 重組雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白

PLS3重組人 PLS3 / Plastin 3 蛋白 Protein

小鼠抗鹽抵抗的酸性0酸酶(AP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 60 (Hsp-60) ELISA Kit 人熱休克蛋白60(Hsp-60)檢測(cè)試劑盒

HumanPolySeriumAigen,PHSAELISAKit 人多聚血清蛋白(PHSA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanangiostatin,ANG檢測(cè)試劑盒人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠心臟干細(xì)胞小鼠固   英文名稱：   Aldosterone   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   ALD

小鼠白蛋白   英文名稱：   Albumin   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   ALB

小鼠乙酰羧化酶   英文名稱：   Mouse Acetyl Coenzyme A Carboxylase   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   ACC

小鼠乙酰   英文名稱：   Mouse Acetylcholine   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   ACH

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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